在現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，單細(xì)胞RNA測序（scRNA-seq）已成為一種強(qiáng)大的工具，用于揭示細(xì)胞間的基因表達(dá)差異和細(xì)胞功能的復(fù)雜性。然而，在單細(xì)胞RNA測序的實(shí)驗(yàn)過程中，支原體污染是一個不可忽視的問題。

一、支原體污染對單細(xì)胞RNA測序的影響

支原體是一類無細(xì)胞壁的原核生物，能在體外培養(yǎng)條件下生長繁殖，并可能污染細(xì)胞培養(yǎng)物。在單細(xì)胞RNA測序中，支原體污染可能帶來以下影響：

數(shù)據(jù)質(zhì)量下降：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞樣本中RNA的降解和污染，進(jìn)而影響測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。這種污染可能導(dǎo)致基因表達(dá)水平的異常波動，使得研究人員難以準(zhǔn)確解析細(xì)胞間的基因表達(dá)差異。

結(jié)果解讀困難：支原體的基因組較小，但編碼的基因數(shù)量較多，且其基因表達(dá)可能與宿主細(xì)胞存在一定的相似性。因此，支原體污染可能導(dǎo)致測序結(jié)果中出現(xiàn)一些難以解釋的基因表達(dá)信號，給結(jié)果的解讀帶來困難。

實(shí)驗(yàn)失敗：在嚴(yán)重污染的情況下，支原體可能大量繁殖并導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物的死亡，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

二、避免支原體污染的重要性

鑒于支原體污染對單細(xì)胞RNA測序的潛在影響，避免污染對于確保實(shí)驗(yàn)成功和數(shù)據(jù)質(zhì)量至關(guān)重要。以下是避免支原體污染的重要性：

提高數(shù)據(jù)可靠性：避免支原體污染可以確保測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性，從而更準(zhǔn)確地揭示細(xì)胞間的基因表達(dá)差異和細(xì)胞功能的復(fù)雜性。

降低實(shí)驗(yàn)成本：避免污染可以減少因?qū)嶒?yàn)失敗而導(dǎo)致的重復(fù)實(shí)驗(yàn)和資源浪費(fèi)，從而降低實(shí)驗(yàn)成本。

加速研究進(jìn)展：通過避免污染，研究人員可以更快地獲得可靠的數(shù)據(jù)，加速研究進(jìn)展，為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出更大的貢獻(xiàn)。

三、支原體污染的防控措施

為了避免支原體污染對單細(xì)胞RNA測序的影響，需要采取一系列防控措施：

嚴(yán)格篩選細(xì)胞來源：在獲取細(xì)胞樣本時，應(yīng)確保細(xì)胞來源的可靠性和清潔度，避免使用可能存在支原體污染的細(xì)胞株或組織。

定期檢測細(xì)胞培養(yǎng)物：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期對培養(yǎng)物進(jìn)行支原體檢測，及時發(fā)現(xiàn)并處理污染問題。常用的檢測方法包括DNA熒光染色法、PCR法和培養(yǎng)法等。

嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范：在細(xì)胞培養(yǎng)和單細(xì)胞RNA測序?qū)嶒?yàn)過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，避免交叉污染和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染。

使用支原體清除劑：在發(fā)現(xiàn)支原體污染時，可以使用支原體清除劑進(jìn)行處理。這些清除劑能夠選擇性地殺死支原體而不影響宿主細(xì)胞的生長和活力。

加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理：加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理是預(yù)防支原體污染的重要手段。應(yīng)定期對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒處理，并對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的設(shè)備和試劑進(jìn)行定期檢查和更新。使用實(shí)驗(yàn)室環(huán)境專用的支原體祛除試劑——Mycoplasma Off，即用型噴霧，高效清除實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的支原體污染。