細(xì)胞污染是指在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，外來(lái)的生物或物質(zhì)進(jìn)入培養(yǎng)體系中并繁殖生長(zhǎng)，影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，主要包括以下幾點(diǎn)：

• 細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖受到抑制。細(xì)胞污染會(huì)占用培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，導(dǎo)致細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖受到抑制，甚至?xí)?dǎo)致細(xì)胞死亡。

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性受到影響。細(xì)胞污染會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)異常的數(shù)據(jù)和結(jié)果，影響實(shí)驗(yàn)的可靠性和準(zhǔn)確性。在一些研究中，細(xì)胞污染甚至?xí)?dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，浪費(fèi)時(shí)間和資源。

• 細(xì)胞的基因表達(dá)和細(xì)胞功能受到影響。細(xì)胞污染可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞基因表達(dá)水平的改變和細(xì)胞功能的異常。這些異常可能會(huì)被錯(cuò)誤地歸因于實(shí)驗(yàn)因素而掩蓋真正的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響非常嚴(yán)重，因此，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要提高警惕，盡可能降低細(xì)胞污染的可能性。
 

預(yù)防污染的關(guān)鍵點(diǎn)

Cell Culture

這里，我們總結(jié)了一些常見(jiàn)的污染“雷區(qū)"，幫助大家盡可能“掃除"細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中障礙。如有遺漏，歡迎小伙伴們?cè)谠u(píng)論區(qū)中補(bǔ)充。

雷區(qū)一：解凍過(guò)程操作不當(dāng)

水面超過(guò)冷凍管蓋沿×

正常情況下，細(xì)胞凍存管內(nèi)部為無(wú)菌設(shè)計(jì)，保障細(xì)胞安全。解凍時(shí)，凍存管的蓋子下邊緣應(yīng)位于水浴鍋?lái)?yè)面上方，避免其接觸水面。

另外，需要定期清潔水浴鍋，為水浴鍋更換無(wú)菌水。可以使用德國(guó)MB水浴環(huán)境專用的支原體祛除試劑：Water Shield。

雷區(qū)二：培養(yǎng)基配制過(guò)程操作不當(dāng)

忽視無(wú)菌操作，導(dǎo)致培養(yǎng)基被污染×

在整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，都應(yīng)注意無(wú)菌操作。在細(xì)胞培養(yǎng)基配好后，建議先抽取少許放入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿內(nèi)，在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置24~48h，檢測(cè)培養(yǎng)液是否有污染。

胎牛血清的品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言也是十分重要的。選擇一款內(nèi)毒素含量低、通過(guò)各項(xiàng)無(wú)菌檢測(cè)的胎牛血清，既保證了實(shí)驗(yàn)安全，又可以在一定程度上確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定。

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，內(nèi)毒素含量≤3EU/ml，各項(xiàng)微生物均為未檢出。

雷區(qū)三：沒(méi)有定期維護(hù)實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生

實(shí)驗(yàn)垃圾不及時(shí)清理，實(shí)驗(yàn)環(huán)境不及時(shí)清潔×

要根據(jù)使用頻率定期清潔實(shí)驗(yàn)室，包括超凈臺(tái)操作臺(tái)面；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面；培養(yǎng)箱、冰箱、水浴鍋、離心機(jī)、顯微鏡等實(shí)驗(yàn)設(shè)備及儀器等。

德國(guó)MB的Mycoplasma-off，支原體祛除噴霧劑，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體、真菌、細(xì)菌等微生物，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。