細(xì)胞培養(yǎng)的開(kāi)始，就是復(fù)蘇細(xì)胞。如何有條不紊地讓細(xì)胞從沉睡中蘇醒？今天就來(lái)給大家總結(jié)幾個(gè)實(shí)用小技巧，快點(diǎn)來(lái)get！

細(xì)胞復(fù)蘇流程：

1、將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化，輕柔晃動(dòng)，加速融化，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時(shí)長(zhǎng)應(yīng)控制在1min中；

2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無(wú)菌操作臺(tái)中，打開(kāi)瓶蓋前，用酒精燈火焰對(duì)瓶口進(jìn)行消毒；

3、將預(yù)加熱的新鮮完quan培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中，加入適量濃度和體積的完quan培養(yǎng)基，輕柔混合均勻；

4、200 × g左右細(xì)胞懸浮液離心5-10分鐘。實(shí)際的離心速度和持續(xù)時(shí)間因細(xì)胞類(lèi)型而異。棄掉上清，加入新鮮完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。

細(xì)胞解凍流程圖

注意事項(xiàng)：

1、液氮溫度低，小心低溫對(duì)人造成的傷害，在液相中儲(chǔ)存的冷凍瓶在解凍時(shí)存在爆炸的風(fēng)險(xiǎn)，因此，取出凍存管的時(shí)候，要做好個(gè)人防護(hù)。

2、通常細(xì)胞集中儲(chǔ)藏在液氮中，取出時(shí)應(yīng)迅速，避免溫差對(duì)其他凍存細(xì)胞造成影響。

3、復(fù)蘇細(xì)胞的核心技術(shù)，簡(jiǎn)而言之就是快融，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞(< 1分鐘）。

4、解凍時(shí)，凍存管先放入無(wú)菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。

5、用預(yù)熱過(guò)的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細(xì)胞。

6、解凍細(xì)胞后，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量維持高密度，以提高細(xì)胞存活率。

7、注意無(wú)菌操作，避免細(xì)胞發(fā)生污染。

細(xì)胞高效解凍的另一個(gè)成功秘訣，就是選擇一款優(yōu)質(zhì)血清！

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，有以下優(yōu)點(diǎn)，可以盡可能幫助實(shí)驗(yàn)者提高細(xì)胞實(shí)驗(yàn)成功率：

1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞，需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會(huì)經(jīng)?；蜷L(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響。

2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號(hào)優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項(xiàng)目?jī)赡瓴恍钃Q批次，細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會(huì)有多批次平行供應(yīng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)屬批號(hào)管理，保證供貨穩(wěn)定。

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6. 針對(duì)特殊科研項(xiàng)目，可提供3-5個(gè)平行批次，讓試驗(yàn)人有更多選擇空間。

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