細胞實驗支原體的影響"

支原體在自然界廣泛存在，尤其可以寄生于人、哺乳動物、植物、昆蟲等物種。

人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體，支原體可以說是無處不在，在細胞實驗過程中，操作稍有不慎，造成細胞支原體感染的風險就大大增加。

在細胞間里，支原體對細胞培養(yǎng)的污染風險不容忽視。

首先細胞感染支原體早期沒有顯著表現(xiàn)。等到實驗人員發(fā)現(xiàn)細胞異常了，此時細胞基本已經(jīng)“病入膏肓"，感染十分嚴重了。

其次，常規(guī)的抗生素對支原體無效。一旦發(fā)生污染，支原體會影響細胞基因表達和營養(yǎng)代謝改變，嚴重干擾實驗結果（包括細胞轉染和病毒包被）。

因此，支原體污染對細胞培養(yǎng)影響重大，一定要重視起來！

1

有效去除支原體的方法

"如果培養(yǎng)的細胞發(fā)生了支原體污染的情況，我們首先建議大家丟棄被污染的細胞，并進行*的消殺。

如果細胞很重要，不能丟棄，那么推薦使用專業(yè)的支原體祛除試劑，既安全，又高效（畢竟甲醛熏蒸、次氯酸鈉、酒精這些東西，既容易對實驗人員造成損害，效率也比較低）。

以支原體祛除劑Zell Shield®為例，進行說明。

Zell Shield®是一種復合抗生素類產(chǎn)品，加入到細胞培養(yǎng)基中，通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成，有效抑制微生物的增殖，對大多數(shù)革蘭氏陽性和陰性細菌、霉菌、酵母、原蟲也同樣有效。

Zell Shield®適合如下兩種情況：

1）培養(yǎng)的細胞面臨支原體的高污染風險，尤其是取自生物有機體的原代細胞。這時建議在培養(yǎng)基中加1%的Zell Shield®。

2）發(fā)現(xiàn)細胞已被支原體污染，而不愿意丟棄（如已轉染，已經(jīng)體外刺激或已費力擴增的細胞），希望繼續(xù)培養(yǎng)，這時可采用下面的“懸浮沖洗法"進行支原體的祛除。

對于非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣品（如細胞種子），發(fā)現(xiàn)有支原體污染，希望挽救。這時我們推薦使用MB公司的Mynox®或Mynox Gold®進行支原體的祛除。

Zell Shield®的用法如下：

1）常規(guī)使用

Zell Shield®為-18℃避光保存。使用前，建議融化分裝。避免反復凍融。

Zell Shield®按1:100直接加入到新鮮配制的培養(yǎng)基。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®，混合后在2~8℃保存可至少4周。37℃進行培養(yǎng)時，最多7天需要更換新的含有Zell Shield®的培養(yǎng)基，以獲得最大的保護。

說明：Zell Shield®在培養(yǎng)基過濾前或過濾后加均可。如果培養(yǎng)基尚未無菌過濾，可在加入Zellshield®后再進行無菌過濾。

一般情況下，使用了Zell Shield®，就不必再額外添加雙抗了。

2）懸浮沖洗法（適合已有支原體污染的細胞）

約98％的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。細胞傳代前，用干凈的PBS懸浮沖洗3次，就能把70%以上的支原體沖洗下來，再通過低速離心，棄上清，即可祛除大部分支原體（離心后細胞沉淀，沖洗下來的支原體在上清中）。再繼續(xù)用含1%Zell Shield®的培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)。細胞再連續(xù)傳代3次，每次都用PBS對細胞進行懸浮沖洗，并用含1%Zell Shield®的培養(yǎng)基培養(yǎng)（見下圖），即可逐漸祛除細胞中的支原體。

另外，需要說明的是ZellShield®含有氟喹諾酮類藥物，可與其他抗生素聯(lián)合使用，作為耐藥性標記。其他抗生素成分不用作耐藥性標記。